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引起雜交石斑魚爆發病毒性神經壞死癥的魚類神經壞死病毒與重組病毒株高度相似

出處:公眾號水生動物健康評估 作者:南湖意 水產養殖網 2019-11-22 09:40:00

論文解讀:Vet World,引起雜交石斑魚爆發病毒性神經壞死癥的魚類神經壞死病毒與重組RGNNV/SJNNV病毒株高度相似。

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病毒性神經壞死癥(VNN)是一種危害嚴重的海洋魚類疾病。VNN在幼蟲期造成100%的死亡率,而幼魚和成魚的死亡率較低。本研究的目的是在馬來西亞一個雜交石斑魚孵化場,確定其相關危險因素和致病因子基因型的同時,檢測VNN的發生。 
           
在馬來西亞西部的一個雜交石斑魚(褐點石斑魚×龍膽石斑魚)孵化場進行橫斷面取樣,以檢測2016年9月30日至2017年3月29日期間常規雜交石斑魚魚苗生產期間是否存在VNN。孵化場每年生產大約兩到三個魚批次。在每個采樣期間,評估與NNV感染和VNN疾病相關的危險因素,如魚齡、水系統、人工飼料、活飼料、生命期(從魚苗到成魚)和水質參數。所有與VNN相關的臨床癥狀均在取樣過程中觀察和記錄。在整個研究期間,共對220個雜交石斑魚魚苗(一個魚池中第0天的3000個仔魚;17個魚池中第10天的85個仔魚;兩個魚池中第20天的40個仔魚;第30、40、60和90天的20個仔魚;以及第180天的14個仔魚)進行了新的取樣和相應的匯集(表1)。
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為了確認VNN引起的病毒的水平傳播,每天從飼養雜交石斑魚的池塘和水池中采集500 mL水樣,一式兩份。為了評估與VNN相關的危險因素,在采樣期間,在混合石斑魚飼養池和罐中的深度約1米處測量水質參數。測量的水質參數包括溫度、溶解氧含量、pH值、鹽度、氨氮、硝酸鹽和亞硝酸鹽濃度,所有這些都是使用手持YSI™儀表在現場測量。記錄的數據被用來確定VNN或其相關病毒的發生與雜交石斑魚不同生活階段孵化場水質的可能關聯。在第10天和第60天采集500mL活飼料樣本,包括橈足類和輪蟲,在第60天、第90天和第180天同樣采集人工飼料樣本,以確定VNN引起的病毒在雜交石斑魚之間可能的水平傳播。在采樣期間采集的所有樣品在進一步分析前均儲存在-20°C下。  
         
對VNN相關序列進行逆轉錄RT-PCR和巢式PCR擴增(表2)。利用MEGA方法,從已知的所有Betanodavirus種的外殼蛋白基因中推斷出包含VNN致病因子的系統發育樹。計算Pearson相關系數,以確定雜交石斑魚樣本中VNN的存在與其相關危險因素之間的相關性強度。
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主要研究結果如下:
孵化場管理              
在整個研究期間,沒有在孵化場實施適當的飼養做法、良好的衛生或檢疫(表3)。設施不同部分之間的生物安全維護也被忽視。孵化場從附近的河口直接向養殖容器抽水,沒有臭氧氧化系統或適當的過濾器來過濾進出水。在第0天獲得的預孵化幼蟲在海水中的圓形產卵池中培養(溫度=32.3℃,鹽度=25.71 ppt)。然后,在第2天,用綠水將幼蟲轉移到土塘(溫度=32.3℃,鹽度=25.71 ppt),并飼養至第25天。在此期間,根據輪蟲的數量,每天給幼蟲喂6-8次室內生產的輪蟲和橈足類。為防止幼蟲暴露在陽光直射下,用黑色遮光網覆蓋和包圍土塘。當幼蟲達到26天齡時,將其轉移到6個圓形聚氯乙烯罐(水溫=32℃,鹽度=26 ppt)中并在其中進行分割,然后飼養至180天齡(生長/成蟲期)。28天時,用人工飼料喂養仔魚,不給它們喂食雜魚。 
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水質參數            
  從第0天到第180天,每天取樣測得的水質參數在孵化場設置的正常范圍內顯示出值(表4)。從第30天到第60天,水溫低于研究期間的其他時間(29°C)。同樣,在第30天到第40天(18-19 ppt)之間,觀察到海水鹽度較低。培養30~180天(5.52~5.74mg/L)的溶解氧明顯高于0~20天(4.42~4.52mg/L)。pH值在180天達到最低,30天達到最高,但不低于7。
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VNN檢測
146個集合樣本和個體樣本中,包括雜交石斑魚、水和人工飼料樣本在內,共有113個樣本在VNN相關病毒檢測中顯示陽性結果。感染的臨床癥狀包括皮膚變黑、脊椎變形、腹脹、皮膚損傷和魚鰭糜爛。VNN存在于雜交石斑魚的整個生命階段,第一次檢測發生在第10天(表5)。
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VNN相關危險因素分析
與VNN相關的危險因素包括水溫、溶解氧含量、鹽度、氨含量、魚體大小(成年魚比幼魚更危險)和生命期(年齡)(表6)。在水樣中檢測到VNN相關病毒證明了該病的水平傳播。
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本研究所發現的所有核苷酸序列彼此具有88%到100%的高核苷酸同源性,分別是NNV/SJNNV (RGNNV/SJNNV) 430.2004(GenBank登錄號JN189932.1)(n=26)。系統發育分析表明,每個VNN病毒陽性樣本中均存在相似種,且隨樣本類型和生命期的不同而不同(圖2)。            
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本研究首次證實了馬來西亞和南洋雜交石斑魚魚類神經壞死病毒重組株(RGNNV/SJNNV)的存在。然而,這種病毒的傳播方式和危險因素之間的關系需要進一步研究,以了解重組株的進化和潛在的新寄主物種。


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